简介：
免疫组化是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原
（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）。免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
操作流程：
1烤片：37℃烘烤30min以上；
2脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，一般在每个试剂中放10min，天气热可以少放几分钟，相反，天气较冷的话，就要适当延长脱蜡时间，一般为12-15min；
3抗原修复：脱蜡后在PBS中洗三遍，每次5min，再加入3%H2O2浸泡10min，以除去内源性的过氧化氢酶；PBS中洗三遍，每次5min；再加入柠檬酸缓冲液，微波修复，使抗原的位点暴露出来；
4血清封闭：冷却至室温后，PBS中洗三遍，每次5min；加上血清，37℃孵育30min，来封闭非特异性的位点；
5加一抗：将温箱中的玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，对照实验组织加PBS，4℃孵育过夜；
6加二抗：将玻片取出，室温复温30min；PBS中洗三遍，每次5min；擦干组织周围的PBS后加上二抗，37℃孵育30min；
免疫荧光实验在此步后DAPI染核：PBS洗三遍，每次5min；加入DAPI，室温孵育10-15min；PBS洗三遍，每次5min；荧光显微镜观察。
7加SABC:PBS洗三遍，每次5min；擦干组织周围的PBS后加上SABC，37℃孵育30min；
8显色：PBS洗三遍，每次5min；擦干组织周围的PBS后加上DAB显色剂，显微镜下观察着色情况，及时终止；
9复染：显色后PBS冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为30s，植物组织3-5min；
10脱水：将复染后的片子置于水中清洗后，依稀将玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，移至通风橱；
11封片：在通风橱中用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封号片子后置于通风柜中晾干。
12阅片：显微镜下观察，根据阳性染色面积和深浅确定目的蛋白表达的强弱。
服务要求：
1.客户需提供石蜡切片/冰冻切片/细胞爬片，及目的蛋白一抗。
2.组织切片厚度小于50um。
3.用于石蜡包埋的组织，活检或手术切除标本应在2小时内取材或固定，避免组织自溶及抗原变性等影响免疫组化结果。
4.取材时应保持所检标本原有的结构、形态，为避免挤压组织，尽量使用锋利刀片，并且避开坏死组织，除取病灶或含待检抗原部位外，还应取病灶与正常交界处，即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区，以形成自身对照。
结果提供：
详细的实验步骤、原始图片、结果分析。